GB5413.19-2010嬰幼兒食品和乳品中游離生物素的測定內容是什么?百檢網檢測范圍廣泛，可根據客戶需求選擇合適的檢測標準及項目安排檢測，全國近千家合作實驗室，CMA/CNAS資質齊全，可就近安排寄樣檢測。今天百檢網就給大家簡單介紹一下GB5413.19-2010嬰幼兒食品和乳品中游離生物素的測定標準內容。

1.范圍

本標準規定了嬰幼兒食品和乳品中游離生物素的測定方法。

本標準適用于嬰幼兒食品和乳品中游離生物素的測定規范性引用文件。

2.規范性引用文件

本標準中引用的文件對于本標準的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,僅所注日期的版本適用于本標準。凡是不注日期的引用文件,其*新版本(包括所有的修改單)適用于本標準。

3.原理

利用植物乳桿菌(Lactobacillus plantarun)對游離生物素的特異性和靈敏性,定量測定出試樣中待測物質的含量。在含有除待測物質以外所有營養成分的培養基中,微生物的生長與待測物質含量呈線性關系,根據透光率與標準工作曲線進行比較,即可計算出試樣中待測物質的含量。

4.試劑和材料

除非另有規定,本方法所用試劑均為分析純,水為GB/T 6682規定的二級水。

4.1 菌株:植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum),ATCC 8014。

4.2 生物素(d-Biotin或Vitamin H)標準品(C10H16N2O3S):純度≥99%。

4.3 培養基

4.3.1 乳酸桿菌瓊脂培養基:見附錄A。

4.3.2 乳酸桿菌肉湯培養基:見附錄A。

4.3.3 生物素測定用培養基:見附錄A。

注:一些商品化合成培養基效果良好,商品化合成培養基按標簽說明進行配制。

4.4 乙醇溶液(50%)。

4.5 硫酸溶液(3%):量取3mL硫酸加入到水中,定容至100mL。

4.6 氫氧化鈉溶液(0.5mol/L):稱取20g氫氧化鈉溶于1000mL水中。

4.7 氯化鈉溶液(9g/L):稱取9.0g氯化鈉溶解于1000mL水中,分裝試管,每管10mL。121℃滅菌15min。

4.8 標準溶液的制備

4.8.1 生物素標準貯備液(100μg/mL):稱取生物素標準品(4.2)用乙醇溶液(4.4)定容至生物素濃度為100μg/mL,貯于冰箱中。

4.8.2 生物素標準中間液(lμg/mL):吸取1mL生物素標準貯備液(4.8.1),用乙醇溶液(44)定容至100mL。

4.8.3 生物素標準工作液(10ng/mL):吸取1mL生物素標準中間液(4.8.2),用乙醇溶液(4.4)定容至100mL。

4.8.4 標準曲線工作液

分兩個濃度,高濃度溶液的濃度為0.2ng/mL;低濃度溶液的濃度為0.lng/mL。從工作液中(4.8.3)吸取兩次各5mL,用水分別定容到250mL和500mL。

注:所有標準溶液要儲存于冰箱內。4.8.1、4.8.2、和4.8.3保存期三個月,4.8.4臨用前配制。

5.儀器和設備

除微生物實驗室常規滅菌及培養設備外,其他設備和材料如下：

5.1 天平:感量為0.1mg。

5.2 pH計:精度≤0.02。

5.3 分光光度計。

5.4 渦旋混合器。

5.5 離心機:轉速≥2000轉/分鐘。

5.6 恒溫培養箱:36℃±1℃。

5.7 冰箱:2℃～5℃。

5.8 無菌吸管:10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器或吸頭。

5.9 瓶口分液器:0mL～10mL。

5.10 錐形瓶:200mL。

5.11 容量瓶(A類):100mL,250mL,500mL。

5.12 單刻度移液管(A類):容量5mL。

5.13 漏斗:直徑90mm。

5.14 定量濾紙:直徑90mm。

5.15 試管:18mm×180mm。

注:玻璃儀器使用前,用活性劑〔月桂磺酸鈉或家用洗滌劑加入到洗滌用水中即可)對硬玻璃測定管及其他必要的玻璃器皿進行清洗,清洗之后在200℃干熱2h。

6.分析步驟

6.1 接種菌懸液的制備

6.1.1 將凍干菌株(4.1)活化后,轉接到乳酸桿菌瓊脂培養基(4.3.1)中,36℃±1℃培養過夜。再轉接2～3代來增強活力。然后再將其從固體培養上轉接到乳酸杄菌肉湯培養基(4.3.2)中培養。

6.1.2 將乳酸桿菌肉湯中的培養液以2000轉/分鐘離心2min～3min,傾出上清液,加入10mL氯化鈉溶液(4.7),混勻,再離心2min～3min,如此清洗3次～4次,吸適量該菌懸液于10mL鹽水(4.7)中,待測。

6.1.3 用分光光度計以氯化鈉溶液(4.7)做空白,于550nm波長下測菌懸液(6.1.2)的透光率,使其透光率在60%～80%之間。

6.2 樣品的處理

6.2.1 干粉樣品

稱取一定量樣品(*至0.0001g)于250mL三角瓶中,該樣品應含0.2μg～0.5μg生物素。繼續6.2.3步驟。

6.2.2 液體樣品

吸一定量的液體樣品于250mL三角瓶中,該樣品應含0.2μg～0.5μg生物素。繼續6.2.3步驟。

6.2.3樣品的提取

…………

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