在做檢測時,有不少關(guān)于“TTC法如何測最低抑菌濃度”的問題,這里百檢網(wǎng)給大家簡單解答一下這個問題。

TTC法測定最低抑菌濃度（ MIC）的步驟：藥液配制及除菌、96孔板準備、抗菌藥物二倍稀釋、加入菌液、設立對照、培養(yǎng)與觀察、MIC值判定。

一、TTC法測定最低抑菌濃度（ MIC）的步驟

1、藥液配制及除菌

首先，根據(jù)藥物的效價或含量及所需體積，準確稱取抗菌藥物，并使用適宜的溶劑（如PBS緩沖液，根據(jù)藥物種類選擇不同pH值）稀釋至所需濃度。抗菌素藥物通常通過過濾除菌，而化學合成類藥物則可能需結(jié)合過濾和高壓滅菌處理。

2、96孔板準備

在96孔板的每個孔中加入含TTC的空白肉湯100μl，作為培養(yǎng)基。此步驟確保每個孔中均有相同的起始條件。

3、抗菌藥物二倍稀釋

在A/B/C三排的第一孔分別加入濃度為512IU/ml或μg/ml的藥液100μl，隨后進行二倍稀釋。即第一孔加藥后充分混勻，吸取100μl加入第二孔，再混勻后吸取100μl加入第三孔，以此類推，直至最后一孔。此時，每孔藥物濃度從左到右依次為：256, 128, 64, 32, 16, 8, 4, 2, 1, 0.5, 0.25, 0.125 IU/ml或μg/ml。

4、加入菌液

在每個孔中加入稀釋好的菌液100μl，形成測定一個藥物MIC值的三次重復（A/B/C三排樣品）。每孔的最終藥物濃度從左到右依次減半。

5、設立對照

在同一塊板的G排設立陰性對照（僅加空白肉湯不加菌液），H排設立陽性對照（加菌液不加藥液），以驗證實驗條件的有效性。

6、培養(yǎng)與觀察

將96孔板放入37度恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16～20小時后觀察結(jié)果。若某孔TTC顯示紅色，表示有細菌生長；若不變色，則表示細菌被抑制。

7、MIC值判定

橫排中未變紅色的最后一孔所對應的濃度即為該藥物的MIC值。

二、TTC法測量最低抑菌濃度（ MIC）的優(yōu)勢

TTC法利用TTC的氧化還原性質(zhì)，通過其顏色變化來指示細菌的生長狀態(tài)。TTC的氧化態(tài)是無色的，當細菌存在且生長活躍時，其內(nèi)部的脫氫酶能將TTC還原為不溶性的紅色三苯甲月替（TTF），從而顯現(xiàn)出紅色。若細菌被藥物抑制而無法生長，則TTC保持無色，據(jù)此可判斷藥物的抑菌效果。

1、直觀性：通過顏色變化直接判斷細菌生長情況，結(jié)果易于觀察。

2、準確性：采用微量二倍稀釋法，能夠精確測定MIC值。

3、高效性：可在同一塊板上進行多種藥物的MIC測定，提高實驗效率。

三、TTC法測MIC的實驗材料與設備

1、微生物菌株：選擇待測的微生物菌株。

2、抗菌物質(zhì)：需要測定其MIC的抗菌物質(zhì)。

3、TTC試劑：2,3,5-三苯基氯化四氮唑。

4、培養(yǎng)基：適合微生物生長的培養(yǎng)基。

5、微量移液器：用于精確取液。

6、培養(yǎng)箱：用于微生物培養(yǎng)。

四、TTC法測MIC的注意事項

1、精確稀釋：確保抗菌物質(zhì)的稀釋過程精確無誤，避免因操作誤差影響MIC的測定結(jié)果。

2、均勻混合：在將微生物懸液與抗菌物質(zhì)混合時，要確保混合均勻，避免局部濃度過高或過低。

3、適宜培養(yǎng)條件：根據(jù)微生物的生長特性選擇合適的培養(yǎng)條件，如溫度、pH值等。

4、觀察時間：TTC的添加時間和觀察時間需要根據(jù)實驗目的和微生物生長速度來確定，以確保結(jié)果的準確性。